Продажа меда с собственной пасеки от сайтпчеловодов.рф краснодарский край, кавказское предгорье разнотравье 700 руб/кг (сбор 2019г) Санкт-Петербург +7-911-2269001 (whatsapp)

Получение и свойства культуры американского гнильца вас larvae

poluchenie-i-svoystva-kultury-amerikanskogo-gniltsa-vas-larvae

Получение и свойства культуры американского гнильца вас. larvae

Получить чистую культуру Вас. larvae на плотной питательной среде из отдельных клеток возбудителя трудно. Поэтому на поверхность плотной питательной среды необходимо вносить как можно больше гнильцовой массы.
Видимый рост отдельных колоний Вас. larvae на среде Томашеца появляется и заметен невооруженным глазом через 24 ч. в виде типичных шероховатых (тип R) колоний размером 1-3 мм. в диаметре; они нежные, слегка выпуклые, вначале прозрачные, затем серо-белые.
Колонии имеют характерные, отходящие в стороны, отростки в виде «усиков». При сплошном росте на поверхности агара (через 48-72 ч с момента посева) появляются серовато-белые наложения, имеющие ограниченные локоно-образные края. На мясо-пептонном сывороточном бульоне они образуют через 24 ч помутнение. Через 48-74 ч на дне пробирки заметен хлопьевидный осадок в виде ваты, легко разбивающийся при встряхивании в равномерную муть.
Наряду с типичными R-формами колоний встречаются и диссоциированные от действия бактериофага и других факторов атипичные RS-формы (переходные) с гладкими краями, с единичными нитевидными отростками или колонии S-формы круглые, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью (рис.).
Биохимические свойства выделенных штаммов
Биохимические свойства выделенных штаммов Вас. larvae изучают путем выращивания на обычных питательных средах пестрого ряда, к которым добавляют 10 % стерильной лошадиной сыворотки. Все типичные штаммы Вас. larvae медленно (6-10 дней) расщепляют глюкозу и левулезу с образованием кислоты, но без газа, не сбраживают арабинозу, ксилозу, лактозу, рамнозу, мальтозу, сахарозу, галактозу, маннит, дульцит, сорбит, инозит.
Не образуют индола, аммиака, сероводорода (отдельные штаммы слабо выделяют сероводород и аммиак). Разжижают желатину, вызывают свертывание и пептонизацию молока, не гидролизуют крахмал, нитраты восстанавливают, не обладают гемолитическими свойствами, каталазный тест – отрицательный.
Серологическая диагностика Американского гнильца
Серологическую диагностику проводят с помощью реакции преципитации, используя ларвейную преципити-рующую сыворотку или реакцию капельной агглютинации.
Антиген для реакции преципитации готовят из десяти погибших от гнильца личинок, которых помещают в ступку, добавляя десятикратное количество физраствора (15 мл для взрослых и 7 мл для 3-4-дневных личинок), тщательно растирают, суспензию нагревают на кипящей водяной бане 15 мин и фильтруют через асбестовую вату до получения прозрачного экстракта. Антигеном для реакции преципитации может служить и прозрачный фильтрат выросшей культуры, профильтрованной через асбестовую вату.
Фильтрат разливают по 0,1-0,2 мл в уленгутовские пробирки и подслаивают такое же количество сыворотки (сыворотки и фильтраты должны быть прозрачными). Реакция преципитации протекает при комнатной температуре в течение 15 мин. При положительной реакции через 0,5-2 мин образуется тонкое, нежное, голубовато-матовое кольцо.
Антигены для реакции агглютинации
Антигены для реакции агглютинации готовят из 5- 10 свежих трупов личинок или «корочек», которые помещают в фарфоровую ступку и заливают 5-10 мл карболизированного 0,5 %-ного физраствора, измельчают пестиком до получения суспензии и фильтруют через ватный фильтр. Фильтрат центрифугируют 10-15 мин при 1500 об/мин, затем осадок растворяют в 10-15 мл указанного выше физраствора, нагревают на водяной бане до 70 °С и в горячем виде фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат вновь центрифугируют при тех же оборотах, и из осадка готовят антиген в виде густой взвеси микробов и спор (10 млрд/мл).
Реакцию агглютинации ставят на предметном стекле: на один его конец пастеровской пипеткой наносят каплю агглютинирующей сыворотки, разведенной физраствором (0,1 мл сыворотки+7,9 мл физраствора), а на другой конец – каплю физраствора. В обе капли вносят такое же количество антигена и хорошо смешивают. При положительном результате в течение 10-20 мин в капле с ларвейной сывороткой жидкость просветляется и наблюдается мелкозернистая агглютинация (появляются белые крупинки). В контрольной капле жидкость остается мутной. Агглютинация в капле с ларвейной сывороткой свидетельствует об американском гнильце.
Фагодиагностика амерканского гнильца
Фагодиагностику осуществляют с применением лар-вейного бактериофага. На поверхность чашки Петри с мясо-пептонным сывороточным агаром шпателем засевают две капли суточной бульонной культуры и наносят в центр каплю бактериофага. Чашку наклоняют для стока бактериофага, а затем переворачивают ее кверху дном и ставят в термостат на 24-48 ч. В положительном случае на месте протекания капли фага образуется полоса, свободная от роста микробов.
Патогенные свойства устанавливают при заражении пчелиного расплода или кроликов. В стерильные бактериологические чашки, на дне которых уложен слой ваты, покрытой двумя слоями стерильной марли, вносят по 10 мл теплого корма: приготовленного из перги – 50 г, пекарских дрожжей – 5 г, воды водопроводной – 100 мл. Смесь нагревают в водяной бане 45 мин при температуре 100 °С и после охлаждения добавляют равный объем непрогретого меда. Затем в здоровой пчелиной семье от сота с расплодом срезают острым, слегка подогретым ножом верхнюю часть ячеек и осторожно извлекают 3-4-дневных личинок, которые размещают в бактериологических чашках по 15-20 штук.
Через сутки выдерживания в термостате при температуре 35 °С отбирают под контролем лупы здоровые (неповрежденные) личинки и переносят их в заранее подготовленную теплую чашку. Личинок заражают путем скармливания им свежего корма, к которому добавлено 2 млрд. исследуемых микроорганизмов. Ежедневно под лупой отбирают больных личинок и подвергают микроскопическому и бактериологическому исследованиям. Контролем служат незараженные личинки, содержащиеся в тех же условиях.
Похожие статьи: отбора и исследования патматериала
– Лабораторные методы диагностики Американского гнильца
Болезни пчел – Среды для выращивания Американского гнильца
Болезни пчел – Заражение американским гнильцем расплода в микроулейках и ульях
Болезни пчел – Лабораторные методы диагностики Европейского гнильца
Болезни пчел – Диагностика Американского гнильца (злокачественный гнилец)
Болезни пчел – Европейский гнилец
Болезни пчел – Гафниоз
Болезни пчел – Риккетсиоз
Болезни пчел – Что такое бактериозы?

Total Page Visits: 34 - Today Page Visits: 1
Рейтинг
( Пока оценок нет )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Сайт для пчеловодов и пасечников
Добавить комментарий